ELISA試劑盒檢驗(yàn)方法詳解：

（1）使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

（2）取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

（3）空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl，樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

（4）混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。

（5）扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

（6）每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外），置37℃反應(yīng)30分鐘。

（7）洗滌，同步驟5。

（8）每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

（9）每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)加樣須注意如下問題：

1、吸取樣品時(shí)，加樣槍吸頭不應(yīng)黏附多余的液體，加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體，這樣會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上，加樣不準(zhǔn)確。

2、不要將吸頭伸入孔中，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面可能會(huì)將孔中的液體吹起來(lái)，加樣不準(zhǔn)確。

3、正確的加樣方法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁加入，應(yīng)注意：

1）角度太小，會(huì)使液體殘留在孔壁上，導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確。

2）吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處。

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