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標(biāo)題High Pure 組織RNA提取試劑盒

   

提供者:上海篤瑪生物科技有限公司    發(fā)布時(shí)間:2024/8/7   閱讀次數(shù):23次 >>進(jìn)入該公司展臺
  

一般描述

高純核糖核酸組織試劑盒是為從組織樣品中純化完整的、不含任何污染性的脫氧核糖核酸的總核糖核酸而設(shè)計(jì)的。低至中等產(chǎn)量的核糖核酸分離。在離液鹽(鹽酸胍)存在下,核酸可與玻璃羊毛狀物的表面結(jié)合。這使得高純過濾管能夠特異性地固定核酸(DNA和RNA),同時(shí)不含污染物。對于RNA分離,結(jié)合條件可以優(yōu)化,以確保所有RNA的固定化。高純度RNA分離試劑盒可以從廣泛的研究樣本材料中快速分離完整的總RNA,包括培養(yǎng)細(xì)胞、哺乳動(dòng)物血液、白細(xì)胞(WBC)、酵母和細(xì)菌。它能迅速從哺乳動(dòng)物組織中分離出總RNA,如老鼠的肝臟、脾臟、肺和心臟。
容量:高純旋轉(zhuǎn)過濾管可容納700 μL樣本量。
樣品材料:固體組織(如小鼠肝、脾、肺、心臟):1 - 25 mg。

樣品大小取決于制備組織的方法;較大樣品(>10 mg)應(yīng)通過轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)化處理。

應(yīng)用

高純度RNA組織試劑盒已用于:
  • 從人體細(xì)胞中提取總RNA,用于cDNA文庫的生成[1]
  • 從培養(yǎng)細(xì)胞中提取總RNA用于實(shí)時(shí)PCR分析[2]
  • 提取大鼠海馬狀突起總RNA[3]
  • 從培養(yǎng)細(xì)胞和人類脊髓中純化總RNA[4]
  • 從心室壁收集的組織中分離總RNA[5]


分離出來的RNA可用于許多下游應(yīng)用:
  • Northern印跡法
  • RACE
  • 引物延伸
  • 差異顯示
  • RNase保護(hù)測定
  • 體外翻譯

特點(diǎn)和優(yōu)勢

  • 在大約30分鐘內(nèi)制備核糖核酸樣品
  • 獲得適合下游應(yīng)用的濃縮核糖核酸。
  • 用一個(gè)試劑盒除去污染物小化核糖核酸的損失,不需要沉淀或其他降解核糖核酸的處理步驟。
  • 無需危險(xiǎn)有機(jī)化合物的使用如氯化銫、苯酚、溴化乙錠。

組分

  • 裂解/結(jié)合緩沖液
  • 脫氧核糖核酸酶ⅰ,凍干
  • 脫氧核糖核酸酶孵育緩沖液
  • 洗滌緩沖液I
  • 洗滌緩沖液II
  • 洗脫緩沖液
  • 高純紡絲過濾管(含玻璃纖維絨)
  • 收集管

質(zhì)量

  • 組織在裂解/結(jié)合緩沖液中破碎和均質(zhì)化,并如所述進(jìn)行純化。
  • 核糖核酸產(chǎn)量是通過測量260納米的光密度來確定的。
  • 完整性和大小分布通過變性瓊脂糖凝膠中核糖體核糖核酸的條帶模式來檢測。
  • 以逆轉(zhuǎn)錄酶MuLV和15為引物,在鏈合成中使用10 & # 956;L的核糖核酸洗脫液。在隨后的聚合酶鏈反應(yīng)中,使用擴(kuò)增高保真聚合酶鏈反應(yīng)系統(tǒng)和甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH)的特異性引物,獲得了預(yù)期的983 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物。
  • 通過聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行檢測,而沒有預(yù)先的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),結(jié)果為不存在污染性的脫氧核糖核酸;沒有獲得擴(kuò)增產(chǎn)物。

制備說明

在失活RNases的離液鹽(鹽酸胍)存在下,組織樣本被破壞和均勻化。然后將勻漿加載到高純旋轉(zhuǎn)過濾管中的玻璃纖維羊毛狀物上。在該方法使用的緩沖條件下,所有核酸均與高純管中的玻璃纖維羊毛狀物結(jié)合,而污染物(鹽、蛋白質(zhì)和其他污染物)則不會結(jié)合。制劑中的DNA被DNase I直接在過濾器上消化。簡單的洗滌和旋轉(zhuǎn)步驟就能很容易地去除被消化的段和其他細(xì)胞污染物。剩余的純化RNA在少量的低鹽緩沖液中洗脫。

其他說明

高純技術(shù)和二氧化硅吸附試劑盒
僅用于生命科學(xué)研究。不用于診斷操作。
圖1:不同均質(zhì)化程序的比較。使用各種程序均質(zhì)化小鼠肝臟。用高純核糖核酸組織試劑盒從每種勻漿中純化總核糖核酸。分離的核糖核酸的等分試樣用特異性針對谷氨酸脫羧酶基因區(qū)域的引物進(jìn)行反向轉(zhuǎn)錄。通過凝膠電泳分析cDNA產(chǎn)物。

泳道1:均質(zhì)化:Ultra Turrax;產(chǎn)量:1.9 & # 956;g/mg組織;A 260/ A 280 : 2.0
泳道2:均質(zhì)化:電動(dòng)一次性塑料杵;產(chǎn)量:3 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道3:均質(zhì)化:研缽和杵,20 G針頭;產(chǎn)量:1.5 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道4:均質(zhì)化:手動(dòng)一次性塑料杵,20 G針頭;產(chǎn)量:1.8 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道5:均質(zhì)化:手動(dòng)一次性塑料杵;產(chǎn)量:3.4 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道6:均質(zhì)化:小珠渦旋;產(chǎn)量:3 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道7:分子量標(biāo)記

關(guān)鍵詞:穩(wěn)定性強(qiáng)  特異性強(qiáng)    靈敏度高  

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