電針三陰交對自然更年期大鼠焦慮行為學(xué)的影響

摘要 目的: 觀察電針三陰交穴對自然更年期大鼠焦慮行為學(xué)的影響。方法: 將大鼠分為正常組、模型組和治療組，治療組在三陰交穴處進(jìn)行電針，隔日 1 次，共治療 15 次。正常組、模型組常規(guī)飼養(yǎng)，隔日抓取刺激。記錄在高架十字迷宮實驗中焦慮行為

數(shù)據(jù)（ 進(jìn)入開放臂次數(shù)、向下探究次數(shù)、封閉臂后腿直立次數(shù)和進(jìn)入開放臂時間等） 。結(jié)果: 與正常對照組比較，模型組的OE% 、OT% 均顯著減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01） ，HD 值均顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜ 0. 01） 表現(xiàn)出明顯的焦慮癥狀，模型組、治療組的 OE + CE 差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＞0. 05） ; 與模型組比較，治療組的 OE%及 OT%均顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0. 05） ，治療組的 HD 值明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0. 05） ; ＲE 值無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論: 電針三陰交有一定的抗焦慮作用。

關(guān)鍵詞 電針; 高架十字迷宮; 自然更年期大鼠; 三陰交

圍絕經(jīng)期綜合征（ Peri-menopausal Syndrome，PMS）是婦科的常見病，指婦女絕經(jīng)前后因卵巢功能衰退，出現(xiàn)性激素波動或減少所致的以植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主，伴有神經(jīng)心理癥狀的一組癥候群，調(diào)查顯示，2030 年我國 50 歲以上婦女將達(dá) 2. 8 億，當(dāng)今社會的激烈競爭，生活作息的不規(guī)律等都影響著圍絕經(jīng)期婦女的身心健康。在圍絕經(jīng)期這一過程中，由于卵巢功能逐漸退化，大部分 PMS 患者因不能適應(yīng)圍絕經(jīng)期的生理變化而表現(xiàn)出特有的身心癥狀，如因植物神經(jīng)功能紊亂而出現(xiàn)的陣發(fā)性潮熱、眩暈、出汗、失眠耳鳴，焦慮不安等。圍絕經(jīng)期焦慮癥臨床表現(xiàn)為焦慮不安、心煩、失眠、敏感多疑等癥狀，常困擾更年期婦女。研究發(fā)現(xiàn)，大約 75%左右的更年期婦女出現(xiàn)神經(jīng)精神癥狀，10% ～ 15% 婦女因癥狀較嚴(yán)重需要接受治療。本實驗以自然衰老更年期大鼠為模型，通過電針三陰交治療后，對大鼠進(jìn)行高架十字迷宮實驗，采用動物行為活動分析系統(tǒng)來分析判定行為學(xué)指標(biāo)，以初步評價電針三陰交穴對更年期大鼠焦慮行為學(xué)的改善作用。

1 材料與方法

1. 1 實驗動物分組及模型制備 根據(jù)文獻(xiàn)方法，11 ～15 月齡雌性 SD 大鼠機(jī)體病理生理與婦女更年期類似，表明已進(jìn)入更年期。故我們選取 11 ～15 月齡雌性SD 大鼠作為本實驗的動物模型。陰道組織涂片法是有效區(qū)分大鼠動情周期各個階段的一種簡便方法，通過陰道涂片法即每日定時將大鼠的陰道涂片用堿性美藍(lán)溶液染色后在顯微鏡下觀察其組織學(xué)變化，連續(xù)觀察 3 個動情周期（ 15 d） ，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、種類及數(shù)量篩選符合圍絕經(jīng)期變化規(guī)律的大鼠 16 只，體重（ 320 ±20） g。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字法分為: 更年期對照組（ 模型組）8 只和電針治療組（ 治療組） 8 只。另將 3 個月齡大鼠8 只作為青年對照組（ 正常組） ，體重（ 220 ± 20） g，共 3組。所有 SD 大鼠均為清潔級，由北京維通利華動物中心提供（ 許可證編號為 SCXK（ 京） 2012 －0001） 。動物置于清潔柜中，實驗室內(nèi)溫度保持在（ 20 ± 2） ℃，濕度為 65%，12 h 光暗周期，自由攝食和飲水。

1. 2 儀器 高架十字迷宮、高架十字迷宮視頻分析系統(tǒng)、韓氏穴位神經(jīng)刺激儀（ 上海欣軟信息科技有限公司） 高架十字迷宮結(jié)構(gòu): 由 2 條相對的開放臂（ Open Arm，長 × 寬分別為 45 cm ×15 cm） 、兩條相對的封閉臂（ Enclosed Arm，長 × 寬 × 高分別為45 cm ×15 cm ×30 cm） 及一個聯(lián)接4 條臂的中央平臺（ CentralPlatform，15 cm × 15 cm） 組成，即開放臂 － 中央平臺 － 開放臂或封閉臂 － 中央平臺 － 封閉臂，此二者互相垂直成為“╈”（ plus） 形狀。封閉臂頂部開放。迷宮四條臂合中央平臺均為深灰色，整體固定于鐵制支架上，使其距地面高度為50 cm。在中央平臺上方安置攝像頭。毫針: 華佗牌不銹鋼針灸針（ 規(guī)格: 長 13 mm，直徑 0. 22 mm; 蘇州華佗醫(yī)療器械有限公司制造） 。

1. 3 針刺治療 穴位定位和刺法參考林文注主編《實驗針灸學(xué)》選取雙側(cè)三陰交穴，直刺 3 mm，進(jìn)行電針刺激，采用疏密波，頻率 2/100 Hz，強(qiáng)度以針柄輕微抖動為宜，每次留針 20 min。隔日 1 次，共計 15 次。其他各組常規(guī)飼養(yǎng)，隔日抓取。

1. 4 行為學(xué)觀測方法 操作間內(nèi)保持較暗的光線（ 以1. 5 m 距離處能區(qū)分大鼠細(xì)微活動的最低亮度為準(zhǔn)） 、室溫 24 ℃、安靜條件下進(jìn)行。迷宮測試開始前將待測大鼠放入1 個鼠籠內(nèi)，任其自由探究5 min 后迅速放于迷宮的中央平臺處，使其頭部正對其中任一開放臂，釋放后即開始觀察測試并同步錄像。每只大鼠測試 5min。取出大鼠后，用干抹布蘸 75% 乙醇及時清除每只動物的排泄物，待乙醇揮發(fā)擴(kuò)散后，再進(jìn)行下一只大鼠的測試。

1. 5 行為學(xué)觀察指標(biāo) 1 ） 進(jìn)入開放臂次數(shù) （ OpenArm Entry，OE） : 進(jìn)入到任一開放臂的次數(shù)，以大鼠 4個爪子均進(jìn)入到臂內(nèi)為準(zhǔn)，中途一個爪子從該臂中完全退出則為該次進(jìn)入活動完成; 2） 進(jìn)入開放臂時間（ Open Arm Time，OT） ，單位: s; 3） 進(jìn)入封閉臂次數(shù)（ Close Arm Entry，CE） : 進(jìn)入到任一封閉臂的次數(shù)，以大鼠 4 個爪子均進(jìn)入到臂內(nèi)為準(zhǔn); 4） 進(jìn)入封閉臂時間（ Close Arm Time，CT） ，單位: s; 5） OE 百分率 = OE/（ OE + CE） ×100%; 6） OT 百分率 = OT/（ OT + CT） ×100% ; 7） 進(jìn)入開放臂和封閉臂的總次數(shù)（ OE + CE） :表示大鼠的運動活力; 8） 向下探究次數(shù)（ Head Dip-ping，HD） : 大鼠置身于中央平臺或開放臂時，一邊用前爪抓住迷宮邊緣，一邊把頭部和肩部伸出開放臂的邊緣向迷宮外面探究的行為次數(shù); 9） 封閉臂內(nèi)后腿直立次數(shù)（ Ｒearing，ＲE） : 大鼠在封閉臂內(nèi)前腿抬起以后腿支持使身體豎立的次數(shù)。

1. 6 分析及數(shù)據(jù)處理方法 運用國際公認(rèn)的荷蘭Noldus 公司開發(fā)的動物行為活動標(biāo)記分析系統(tǒng) TheObserver 5. 0 和 Etho Vision 3. 0 兩套軟件對各組大鼠有關(guān)自主活動、學(xué)習(xí)與記憶、焦慮等行為進(jìn)行分析評價。采用 SPSS 17. 0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計，數(shù)據(jù)以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，先進(jìn)行正態(tài)分布檢驗，計量資料進(jìn)行單因素方差分析，方差不齊者用秩和檢驗。

2 結(jié)果

2. 1 電針三陰交對大鼠 OE% 、OT% 、OE + CE 的影響與正常對照組比較，模型組的 OE%、OT% 均顯著減少（ P ＜0. 05，P ＜0. 01） 表現(xiàn)出明顯的焦慮癥狀。與模型組比較，治療組的 OE% 及 OT% 均顯著增高（ P ＜0. 05） 。（ 見表 1）

2. 2 電針三陰交對大鼠 HD 和 ＲE 的影響 與正常組比較，模型組的 HD 值均顯著升高（ P ＜ 0. 01） ，表現(xiàn)明顯的焦慮癥狀。與模型組比較，治療組的 HD 值顯著降低（ P ＜0. 05） 。（ 見表 2）

3 討論

圍絕經(jīng)期綜合征中醫(yī)稱為“絕經(jīng)前后諸癥”范疇，歷代文獻(xiàn)關(guān)于本病的論述散見于“臟躁”“心悸”“失眠”“眩暈”“頭痛”“郁證”等病癥中。其病機(jī)主要為腎氣虛，天癸竭，沖任脈虛，臟腑氣血功能失調(diào)。隨著我國人口結(jié)構(gòu)不斷老齡化和社會競爭日益激烈，不良的工作環(huán)境、家庭關(guān)系緊張及精神等因素影響，婦女進(jìn)入更年期逐漸增加、年齡提早，從而使圍絕經(jīng)期焦慮癥的發(fā)病率亦明顯增加。因此治療和緩解更年期綜合征焦慮癥具有重要的社會意義。

三陰交在調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)、增強(qiáng)免疫功能、調(diào)節(jié)血流變以及對子宮肌電收縮影響和大腦中樞參與方面已取得一定認(rèn)識。三陰交作為足太陰脾經(jīng)經(jīng)穴，又是足太陰、足厥陰、足少陰三條經(jīng)脈的交會穴，本穴在千金方中言其別名為承命、太陰，具有補(bǔ)脾胃，助運化，化濁利濕，通經(jīng)活絡(luò)，調(diào)和氣血，滋補(bǔ)肝腎之功效，婦女的生理特點與肝脾腎三臟關(guān)系密切，因此三陰交穴在治療婦科病癥方面有著獨特的優(yōu)勢，常作為婦科疾病的首選穴位。本實驗通過電針三陰交穴，來改善圍絕經(jīng)期所出現(xiàn)的身心癥狀。

90% 的圍絕經(jīng)女性擁有完整的卵巢，且其激素水平呈現(xiàn)逐漸衰退過程，去勢模型大鼠除影響雌激素外還使促性腺激素釋放激素、黃體生成素及促卵泡素等水平快速下降。不僅如此，卵巢的摘除還會影響雄激素的水平。采用 X 線照射破壞卵巢所致癥狀來反映圍絕經(jīng)期綜合征主要表現(xiàn)，但經(jīng) X 線照射后可明顯出現(xiàn)放射線腸炎癥狀，嚴(yán)重可伴有大鼠死亡�？傊�采用去勢模型和 X 線照射破壞卵巢模型雖然能達(dá)到激素水平的變化，但不能準(zhǔn)確地模擬自然衰老過程出現(xiàn)的病理生理變化。本實驗以自然衰老更年期大鼠為模型，因圍絕經(jīng)期出現(xiàn)的機(jī)體變化不是單純卵巢的生理改變和相關(guān)激素水平的變化，而是機(jī)體整體的改變，由于大鼠在自然衰老過程中未受到人為地干預(yù)，其機(jī)體生理病理的變化與人類圍絕經(jīng)期的變化極為相似，可較客觀地反映人體的變化過程。這也符合中醫(yī)順應(yīng)自然的理論。

實驗中所采用的高架十字迷宮是國際公認(rèn)的動物焦慮行為測評的首選裝置。利用動物對新異環(huán)境的探究特性和對高懸敞開臂的恐懼形成動物的矛盾沖突來考察動物的焦慮狀態(tài)。并且其作為焦慮大鼠模型的評價方法具有很好的復(fù)測信度。觀察實驗指標(biāo)以大鼠 OE%與 OT%反映大鼠焦慮狀態(tài); 以（ OE + CE）反映大鼠的運動能力; 以開放臂和中央臺區(qū) HD 次數(shù)反映在非保護(hù)區(qū)的探索行為，與焦慮程度具有相關(guān)性; 封閉臂 ＲE 值也可用來觀察電針三陰交有無鎮(zhèn)靜作用及鎮(zhèn)靜強(qiáng)度。本實驗結(jié)果中，模型組的 OE%、OT% 分別為（ 14. 44 ± 3. 85） 、（ 3. 10 ± 0. 64） 表明自然衰老更年期大鼠較少進(jìn)入或者停留于開放臂，而趨向探究封閉臂，而電針治療組的 OE%、OT% 值分別為（ 26. 85 ±5. 99） 、（ 12. 70 ± 4. 01） 較模型對照組顯著增加（ P ＜0. 05） ，說明該組大鼠對開放臂和非保護(hù)區(qū)的探究增加，提示電針三陰交具有抗焦慮作用。與模型組比較，治療組的 HD 值顯著降低，HD 具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0. 01） ，因此，我們可以認(rèn)為電針三陰交具有一定的抗焦慮作用。