【摘要】目的建立高效液相法測(cè)定山楂中槲皮素含量的方法。方法色譜條件：Shim-PackVP-ODSC18柱，流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸溶液（52∶48,V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)為373nm。結(jié)果槲皮素的回歸方程為Y=2855.4X-10974（r=0.9999，n=5），線(xiàn)性范圍為0.0189～0.0566μg；平均回收率為96.44%，RSD為1.51%。結(jié)論此法簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠，為山楂藥材的質(zhì)量控制提供快速準(zhǔn)確的測(cè)定方法。
　　
　　【關(guān)鍵詞】山楂槲皮素 高效液相色譜法 含量測(cè)定
　　
　　山楂為常用中藥,具有消食健胃和行氣散淤的功效,其主要成分為黃酮類(lèi)和有機(jī)酸類(lèi)化合物［1］。山楂可降壓、降血脂、增加冠脈流量、強(qiáng)心和抗心律不齊，有效成分為黃酮類(lèi)化合物［2］，其果實(shí)主要成分為槲皮素和金絲桃苷［3］。目前,《中國(guó)藥典》僅測(cè)定了其有機(jī)酸（以枸櫞酸計(jì)）的含量，并未對(duì)黃酮類(lèi)成分槲皮素的含量測(cè)定法進(jìn)行規(guī)定。本文參閱文獻(xiàn)［4~6］用反相高效液相法對(duì)山楂果實(shí)提取物中的槲皮素進(jìn)行了含量測(cè)定方法學(xué)的研究。結(jié)果表明,該測(cè)定方法準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好,獲得了滿(mǎn)意的結(jié)果。為建立山楂果實(shí)中槲皮素的含量測(cè)定方法,制定山楂中槲皮素的含量限度,進(jìn)一步完善山楂的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。
　　
　　1儀器與試藥
　　
　　電子分析天平（AUW220D,SHIMADZU）；CQ2500型超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司）；恒溫水浴鍋（常州國(guó)華電器有限公司）；UV-2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（SHIMADZU）；高效液相色譜儀（日本島津公司）：LC-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外檢測(cè)器，CTO-10ASvp柱溫箱，HW色譜工作站。藥材山楂（市售，經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院天然藥物化學(xué)與生藥學(xué)教研室陳立娜博士鑒定）；槲皮素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用，批號(hào)10081-9905）；甲醇（色譜級(jí)），去離子水（南京醫(yī)科大學(xué)分析測(cè)試中心提供），磷酸（分析級(jí)）。
　　
　　2方法與結(jié)果
　　
　　2.1色譜條件色譜柱為Shim-packVP-ODSC18柱（150mm×4.6mm,5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸溶液（52∶48）；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)373nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μl。
　　
　　2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取在105℃干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含槲皮素4μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
　　
　　2.3供試品溶液的制備取藥材粉末約1.1g,精密稱(chēng)定，置錐形瓶中,加入甲醇40ml,25%鹽酸溶液5ml搖勻,超聲處理20min,移置水浴中加熱回流2h，迅速冷卻至室溫,甲醇定容至50ml量瓶中,搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。取對(duì)照品溶液、供試品溶液于上述色譜條件下進(jìn)樣，得HPLC圖譜（見(jiàn)圖1），分析得系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。見(jiàn)表1。
　　
　　圖1HPLC圖（略）
　　
　　表1系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
　　
　　2.4線(xiàn)性范圍的考察分別精密吸取槲皮素對(duì)照品溶液（3.8μg/ml）5.0，7.5，10.0，12.5，15.0μl，依次注入液相色譜儀，按上述色譜條件，分別進(jìn)行分析，測(cè)定其峰面積值，并以對(duì)照品量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，得槲皮素回歸方程：Y=2855.4X－10974（r=0.9999，n=5）。結(jié)果表明：槲皮素對(duì)照品在0.0189～0.0566μg范圍呈成良好的線(xiàn)性關(guān)系。
　　
　　2.5進(jìn)樣精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取槲皮素對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，計(jì)算RSD=0.35%。
　　
　　2.6溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液，每隔1h時(shí)進(jìn)樣、測(cè)定一次，結(jié)果表明：供試品溶液在所測(cè)的4h內(nèi)測(cè)得的結(jié)果基本一致，槲皮素的RSD=1.27%。
　　
　　2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)樣品6份，按供試品溶液制備項(xiàng)下方法制備并測(cè)定，結(jié)果槲皮素含量為山楂果實(shí)生藥量的0.0132%。
　　
　　2.8回收率實(shí)驗(yàn)取已知槲皮素含量（0.0132%）的樣品6份，每份約0.65g，分別精密加入槲皮素對(duì)照品溶液（0.0850mg/ml）1ml，按供試品溶液制備項(xiàng)下方法制備并測(cè)定，結(jié)果平均回收率為96.44%，RSD為1.51%。
　　
　　2.9樣品含量測(cè)定按“2.3”項(xiàng)下方法制備3批市售山楂藥材供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。
　　
　　表2樣品中槲皮素含量測(cè)定結(jié)果（略）
　　
　　3討論
　　
　　實(shí)驗(yàn)中分別采用了甲醇-0.4%磷酸溶液，甲醇-0.2%磷酸溶液兩個(gè)不同的流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，當(dāng)將甲醇-0.4%磷酸溶液系統(tǒng)調(diào)整為（52∶48）時(shí)，不僅分離效果好，靈敏度較高，且大大縮短了待測(cè)組分的保留時(shí)間（與文獻(xiàn)［4,5］相比）。故最后選擇甲醇-0.4%磷酸溶液（52∶48）為本實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相系統(tǒng)。
　　
　　另外，本實(shí)驗(yàn)供試品溶液的制備方法與文獻(xiàn)［4］的方法相比較簡(jiǎn)單，所提得待測(cè)組分的含量是文獻(xiàn)［4］報(bào)道的2.3倍。
　　
　　本文考察了3批不同批次山楂藥材中槲皮素的含量。建立了一種更準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、快速的HPLC測(cè)定方法，對(duì)于評(píng)價(jià)山楂藥材及其制劑的質(zhì)量提供了更為有效的方法。