高回收率(75%-105%)，多種樣品的低成本提取方法；高重復(fù)性；檢測過程只需要不到1.5小時；五合一處理方法更省時、經(jīng)濟、環(huán)保。

產(chǎn)品概述

沙門氏菌檢測試劑盒酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應(yīng)原理，含有沙門氏菌檢測試劑盒(SEM)的抗體已經(jīng)包被于微孔板上。藥物分析時，樣品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有SEM，會競爭SEM抗體，抑制SEM-HRP與板上包被的抗體結(jié)合。加入底物后，產(chǎn)物的顏色強弱與樣品中SEM的濃度成反比。

 試劑盒組成

已包被的酶標板（可拆式）                                            12×8 孔

標準液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可選                                        1×0.8ml

HRP酶標抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×樣品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×濃縮洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

終止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本試劑盒應(yīng)當(dāng)在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過3個月不使用試劑盒，

請將SEM-HRP酶標抗原放置-20℃或者冰凍保存。

檢測試劑盒以外需要提供的設(shè)備或材料

1)      酶標儀(450 nm)

2)      恒溫培養(yǎng)箱

3)      勻漿器

4)      蒸干器

5)      漩渦振蕩器

6)      移液槍(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得*佳實驗效果。

1)      標準品中含有沙門氏菌檢測試劑盒，請小心使用。

2)      不要使用過期的試劑盒。

3)      不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4)      盡量保持室溫20-25℃，避免在通風(fēng)口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發(fā)。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應(yīng)該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5)      水質(zhì)量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6)      加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7)      孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8)      從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質(zhì)量的風(fēng)險。

9)      將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

樣品的準備【沙門氏菌檢測試劑盒】

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內(nèi)解凍。

1×樣品提取液

按1：9的比例配制樣品提取濃縮液和雙蒸餾水。

1）飼料（用于檢測添加到飼料中的魚粉、蝦粉或動物組織的SEM）

（1）    取0.5g勻質(zhì)樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋振蕩1min；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速渦旋震蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始樣品）到另一試管（避免觸及下層水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70 °C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，轉(zhuǎn)速渦旋振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：4.0

2）魚/蝦/肉（牛肉/雞肉/豬肉）：可用于五合一前處理方法

（1）    稱取1g勻漿樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋震蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3h，培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下（20-25℃）4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品)到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，上清液不足3mL，請85℃水浴3分鐘。在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；（注：肝臟組織富含脂肪、色素等，為防止乳化現(xiàn)象，建議選用4mL正己烷溶解，渦旋震蕩30秒后，再進行下一步操作）

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩1分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)開始。

稀釋倍數(shù)：2.0

3）雞蛋【沙門氏菌檢測試劑盒】

（1）    稱取1g雞蛋樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70℃減壓蒸餾或60-70℃氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品抽提工作液體，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)開始。

4）蜂蜜

（1）    稱取1g蜂蜜加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

5）牛奶

（1）    對于含脂牛奶，取待測牛奶樣品3ml室溫4000g，5min。除去上層脂肪層。（對于脫脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

6）血清【沙門氏菌檢測試劑盒】

（1）        稱取1g血清加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）        50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（4）        室溫下4000g離心10分鐘；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）        加入1mL1×樣品提取液，劇烈

（8）        振蕩2分鐘；

（9）        室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

7）尿樣

（1）    取3ml尿樣，4000g離心5min。

（2）    離心后稱取1ml，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（5）    室溫下4000g離心10分鐘；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（8）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（9）    室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

檢測步驟

試劑的準備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風(fēng)險。

1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合

檢測

\以下為計算份量的表格，用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）    加入100mL的標準品于所設(shè)定的孔中；

（2）    加入100mL的樣品于所設(shè)定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

（4）    室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5）    洗板3次，每次應(yīng)該加入250mL 1×洗液，*后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育20分鐘后，每孔加入100mL的終止液終止反應(yīng);

（8）    在450nm或450/650nm下讀OD值 (讀數(shù)前，用吸水紙將板底部的指痕和水分擦去，避免影響讀數(shù))。

10．結(jié)果計算【沙門氏菌檢測試劑盒】

（1）    分別計算標準、質(zhì)控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100

（2）    以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。

（3）    從標準曲線上讀取質(zhì)控和樣品的濃度值。

（4）    樣品檢測下限計算方法如下：

樣品檢測下限 = (0.025ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

例如，肉類樣品的稀釋倍數(shù)是2.0,那么肉類樣品的檢測下限是0.05ppb,定量檢測下限是0.2ppb。

180962     GeneRead Gene Panel Mastermix (0.6 ml)               CNY                             

159310     Multibarrier Pouch Large (100)                 CNY                             

158922     RNase A Solution (650 µl)                  CNY                             

158912     Protein Precipitation Solution (350 ml)             CNY                             

9236427  Finger pads, set (8), TWI          CNY                             

9236242  O-Ring, Drawer, BR8 RD          CNY                             

9236163  Spill resistance upgrade kit, RapidPlate            CNY                             

9236156  Tool, calibration, vertical, RapidPlate               CNY                             

9235699  Power Cable, RCS1            CNY                             

9235474  Microplate adapter, 384-well plate                   CNY                             

9235330  96-well Centrifuge Adaptor 2.01     Black in color   CNY                             

9235299  Plunger tip, syringe 1.0 ml                 CNY                             

9235106  Manual, user, hardware BR8000 US                 CNY                             

9234887  T-piece, vacuum tubing, connector          CNY                             

9238668  Control knob              CNY                              【沙門氏菌檢測試劑盒】

9238650  Main switch ETA, 16 A               CNY                             

9238638  Microswitch              CNY                             

9241894  QIArent&go - Rent out fee PyroMark               CNY                             

9240908  Upgrade QIAplex MDD             CNY                             

9240973  Solenoide, sample tracking, Qsym            CNY                             

9240964  Motor, z, pipetting system, Qsym             CNY                             

9240913  Battery, PC-104, AP196/98                 CNY                             

9240679  Bimba Rotary Actuator, Magnetic, AP96                  CNY                             

9240778  Solid State Relay Update, AP98                 CNY                             

6000-5010        Reagent Trough Lids                  CNY                             

6000-5007        Collection Tube Cap (ｄrop on caps)           CNY                             

9241393  Channel, pipetting system, Qsym              CNY                             

9241364  Foil, keypad, EZ1a             CNY                             

9241362  Underlay, key panel, EZ1a                 CNY                             

9240755  Downtube, Reagent #2-6, AP96/196                 CNY                             

9240753  Downtube, Reagent #1, AP98                   CNY                              【沙門氏菌檢測試劑盒】

9242199  Shock mounts, Eppendorf, AP196/98                  CNY                             

5000-1325        Board Regulator 230V, SKR1            CNY                             

EK0544     hVEGFR-ELISA 人VEGFR2/KDRELISA試劑盒 Human VEGFR2/KDR ELISA Kit         96 tests                      

EK0561     hECad-ELISA     人鈣粘附蛋白ELISA試劑盒  Human E-Cadherin ELISA Kit   96 tests                      

EK0563     hCT1-ELISA       人心營養(yǎng)素-1ELISA試劑盒    Human Cardiotrophin-1 ELISA Kit    96 tests                      

EK0573     hCD40L-ELISA  人可溶性CD40LELISA試劑盒        Human soluble CD40L ELISA Kit       96 tests                      

EK0575     hEGVEGF-ELISA        人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子ELISA試劑盒  Human EG-VEGF ELISA Kit       96 tests                     

EK0581     hRes-ELISA       人抵抗素ELISAELISA試劑盒 Human Resistin ELISA Kit         96 tests                       【沙門氏菌檢測試劑盒】

EK0584     hTNF         人TNFβELISA試劑盒    Human TNFβ ELISA Kit 96 tests                      

EK0588     hVEGFC-ELISA  人VEGF-CELISA試劑盒  Human VEGF-C ELISA Kit 96 tests                      

EK0641     hSurv-ELISA      人生存素ELISA試劑盒  Human Survivin ELISA Kit         96 tests                      

EK0642     hTSP2-ELISA     人TSP2ELISA試劑盒       Human TSP2 ELISA Kit     96 tests                      

EK0644     hCD105-ELISA  人CD105ELISA試劑盒   Human CD105 ELISA Kit  96 tests                      

EK0658     hAPP-ELISA       人APP ELISA試劑盒       Human APP ELISA Kit       96 tests                      

EK0663     hBAFF-ELISA     人 BAFF ELISA試劑盒    Human BAFF ELISA Kit     96 tests                      

EK0667     hPCad-ELISA     人P-CadherinELISA試劑盒     Human P-Cadherin ELISA Kit   96 tests                      

EK0702     hCD40-ELISA    人CD40ELISA試劑盒      Human CD40 ELISA Kit    96 tests                      

EK0706     hNCAM-ELISA  人CD56/NCAM-1ELISA試劑盒        Human CD56/NCAM-1 ELISA Kit      96 tests                      

EK0744     hcMet-ELISA    人c-Met/HGFRELISA試劑盒 Human c-Met/HGFR ELISA Kit         96 tests                      

EK0756     hErbB2-ELISA   人ErbB-2/Neu2ELISA試劑盒 Human ErbB-2/Neu2 ELISA Kit         96 tests                      

EK0757     hFeuA-ELISA     "人胎球蛋白AELISA試劑盒

"       HumanFetuin-A ELISA Kit         96 tests                      

EK0770     hHBEGF-ELISA 人肝素結(jié)合表皮生長因子ELISA試劑盒      Human HBEGF ELISA Kit 96 tests                      

EK0777     hIL6Ra-ELISA   人IL-6RaELISA試劑盒 Human IL-6Ra ELISA Kit  96 tests                     

EK0779     hIL7-ELISA        人IL-7ELISA試劑盒       Human IL-7 ELISA Kit       96 tests                       【沙門氏菌檢測試劑盒】

EK0799     hIL27-ELISA      人IL-27ELISA試劑盒    Human IL-27 ELISA Kit     96 tests                      

EK0807     hCSF1R-ELISA   人CSF1R/M-CSFRELISA試劑盒      Human CSF1R/M-CSFR ELISA Kit      96 tests                      

EK0816     hKal3-ELISA      人Kallikrein 3ELISA試劑盒     Human Kallikrein 3 ELISA Kit   96 tests                      

EK0829     hRANK-ELISA   人 Receptor Activator of NF-κB (RANK)ELISA試劑盒 Human Receptor Activator of NF-κB (RANK) ELISA Kit    96 tests                      

EK0850     hMPO-ELISA     人過氧化物酶ELISA試劑盒  Human Myeloperoxidase (MPO) ELISA Kit       96 tests                      

EK0859     hPAI1-ELISA      人PAI-1ELISA試劑盒      Human PAI-1 ELISA Kit     96 tests                      

EK0867     hDKK1-ELISA    人DKK-1ELISA試劑盒    Human DKK-1 ELISA Kit   96 tests                      

EK0873     hPECAM-ELISA          人PECAM-1/CD31ELISA試劑盒      Human PECAM-1/CD31 ELISA Kit     96 tests                      

EK0884     hBMP7-ELISA   人BMP-7ELISA試劑盒   Human BMP-7 ELISA Kit  96 tests                      

EK0895     hp53-ELISA       人p53 ELISA試劑盒        Human p53 ELISA Kit       96 tests                      

EK0904     hCEA-ELISA       人CEAELISA試劑盒        Human CEA ELISA Kit       96 tests