高回收率(75%-105%)，多種樣品的低成本提取方法；高重復(fù)性；檢測過程只需要不到1.5小時；五合一處理方法更省時、經(jīng)濟、環(huán)保。

產(chǎn)品概述

肉毒毒素檢測試劑盒酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應(yīng)原理，含有肉毒毒素檢測試劑盒(SEM)的抗體已經(jīng)包被于微孔板上。藥物分析時，樣品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有SEM，會競爭SEM抗體，抑制SEM-HRP與板上包被的抗體結(jié)合。加入底物后，產(chǎn)物的顏色強弱與樣品中SEM的濃度成反比。

 試劑盒組成

已包被的酶標板（可拆式）                                            12×8 孔

標準液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可選                                        1×0.8ml

HRP酶標抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×樣品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×濃縮洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

終止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本試劑盒應(yīng)當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過3個月不使用試劑盒，

請將SEM-HRP酶標抗原放置-20℃或者冰凍保存。

檢測試劑盒以外需要提供的設(shè)備或材料

1)      酶標儀(450 nm)

2)      恒溫培養(yǎng)箱

3)      勻漿器

4)      蒸干器

5)      漩渦振蕩器

6)      移液槍(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得*佳實驗效果。

1)      標準品中含有肉毒毒素檢測試劑盒，請小心使用。

2)      不要使用過期的試劑盒。

3)      不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4)      盡量保持室溫20-25℃，避免在通風(fēng)口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發(fā)。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應(yīng)該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5)      水質(zhì)量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6)      加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7)      孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8)      從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質(zhì)量的風(fēng)險。

9)      將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

樣品的準備【肉毒毒素檢測試劑盒】

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內(nèi)解凍。

1×樣品提取液

按1：9的比例配制樣品提取濃縮液和雙蒸餾水。

1）飼料（用于檢測添加到飼料中的魚粉、蝦粉或動物組織的SEM）

（1）    取0.5g勻質(zhì)樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋振蕩1min；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速渦旋震蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始樣品）到另一試管（避免觸及下層水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70 °C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，轉(zhuǎn)速渦旋振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：4.0

2）魚/蝦/肉（牛肉/雞肉/豬肉）：可用于五合一前處理方法

（1）    稱取1g勻漿樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋震蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3h，培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下（20-25℃）4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品)到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，上清液不足3mL，請85℃水浴3分鐘。在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；（注：肝臟組織富含脂肪、色素等，為防止乳化現(xiàn)象，建議選用4mL正己烷溶解，渦旋震蕩30秒后，再進行下一步操作）

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩1分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)開始。

稀釋倍數(shù)：2.0

3）雞蛋【肉毒毒素檢測試劑盒】

（1）    稱取1g雞蛋樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70℃減壓蒸餾或60-70℃氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品抽提工作液體，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)開始。

4）蜂蜜

（1）    稱取1g蜂蜜加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

5）牛奶

（1）    對于含脂牛奶，取待測牛奶樣品3ml室溫4000g，5min。除去上層脂肪層。（對于脫脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

6）血清【肉毒毒素檢測試劑盒】

（1）        稱取1g血清加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）        50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（4）        室溫下4000g離心10分鐘；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）        加入1mL1×樣品提取液，劇烈

（8）        振蕩2分鐘；

（9）        室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

7）尿樣

（1）    取3ml尿樣，4000g離心5min。

（2）    離心后稱取1ml，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（5）    室溫下4000g離心10分鐘；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（8）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（9）    室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

檢測步驟

試劑的準備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風(fēng)險。

1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合

檢測

\以下為計算份量的表格，用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）    加入100mL的標準品于所設(shè)定的孔中；

（2）    加入100mL的樣品于所設(shè)定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

（4）    室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5）    洗板3次，每次應(yīng)該加入250mL 1×洗液，*后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育20分鐘后，每孔加入100mL的終止液終止反應(yīng);

（8）    在450nm或450/650nm下讀OD值 (讀數(shù)前，用吸水紙將板底部的指痕和水分擦去，避免影響讀數(shù))。

10．結(jié)果計算【肉毒毒素檢測試劑盒】

（1）    分別計算標準、質(zhì)控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100

（2）    以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。

（3）    從標準曲線上讀取質(zhì)控和樣品的濃度值。

（4）    樣品檢測下限計算方法如下：

樣品檢測下限 = (0.025ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

例如，肉類樣品的稀釋倍數(shù)是2.0,那么肉類樣品的檢測下限是0.05ppb,定量檢測下限是0.2ppb。

9020586  Power Supply, 24V 60W, DML 3000                   CNY                             

9013314  Shaker adapter, 192-tube, 5 ml                 CNY                             

9013211  Cabling kit, data, BR8000                  CNY                              【肉毒毒素檢測試劑盒】

9011747  Worktable left, BR8000 v1.01          CNY                             

132568     NeXtal Stock Methoxy-PEG 5000 (50)      30% w/v Methoxypolyethylene glycol 5000 - 50mL (4 x 12,5 ml tube)    CNY                             

800311     Custom Primer                   CNY                             

766134     PAXgene Tissue miRNA Kit (50)                 CNY                             

203443     HotStarTaq Master Mix Kit (250)    "3 x 0.85 ml HotStarTaq Master Mix* containing 250 units HotStarTaq DNA Polymerase total, 2 x 1.7 ml distilled water

- premixed solution for high PCR specificity

- HotStarTaq Master Mix, HotStarTaq DNA Polymerase, several kit sizes from 250 u up to 2500 u available"       CNY                             

201901     dNTP Mix, PCR Grade, 10mM, 4x200µl  "dNTP Mix contains dATP, dCTP, dGTP, ａnd dTTP in water (pH 7.5), 10mM each.

for 800 reactions based on 50ul PCR (0.2uM each dNTP)"      CNY                             

201209     Taq DNA Polymerase (25000)  "100 x 250 units Taq DNA Polymerase, 100 x 1.2ml PCR Buffer, 100 x 2.0ml Q-Solution, 100 x 1.2ml MgCl2

NEW! Now with 100 x 1,2 ml CoralLoad PCR Buffer

Taq DNA Polymerase is now supplied with CoralLoad PCR Buffer, which has all of the advantages of QIAGEN PCR Buffer but can also be used to directly load the PCR reaction onto an agarose gel without the need to add a gel loading buffer. CoralLoad PCR Buffer provides the same high PCR specificity ａnd minimal reaction optimization as conventional QIAGEN PCR Buffer. Additionally, it contains two marker dyes: an orange dye ａnd a red dye, that facilitate estimation of DNA migration distance ａnd optimization of agarose gel run time."         CNY                             

200203     TopTaq DNA Polymerase (250)         "1 x 250U TopTaq DNA Polymerase, 10x TopTaq PCR Buffer, 1x CoralLoad Concentrate, 5x Q-solutions, 25mM MgCl2

For highly reliable end-point PCR with unrivalled ease-of-use

The first fridge storage enzyme"     CNY                             

180462     GeneRead DNA Library L Core Kit (12)             CNY                             

159916     Generation Capture Column Kit (300)               CNY                             

159104     QIAsafe DNA Tubes (50)            CNY                             

158902     RBC Lysis Solution(450 ml)                 CNY                            

678791     ipsogen MLL-AF9 type B e8e9 Standards                   CNY                             

678391     ipsogen MLL-AF4 e9e5 Standards             CNY                             

34860       Anti-GST Antibody (100µg)                CNY                             

9021057  Door Assy, Lower Right, DCU            CNY                              【肉毒毒素檢測試劑盒】

9021056  Door Assy, Lower Left, DCU              CNY                             

9021002  Belt, Y Drive, DCU             CNY                             

9020994  De-Capper Assembly, DCU                 CNY                             

9020931  Fixation angles, vac.pump v2.0, BR8000                   CNY                             

9020906  HEPA filter system, SMC, QGX          CNY                             

9020704  Lid frame with hinge C1x          CNY                             

9020638  Baseboard, side, Cabinet Qsym                 CNY                             

9020634  Panel, left, Cabinet Qsym                  CNY                             

9020626  Holder, BC scanner, Cabinet Qsym            CNY                             

9020333  Fuse - Thermal (5), RGQII                  CNY                             

9017687  AUTOPURE Pro K Pump            CNY                             

9017602  Pump, MultiFlow Disp, BR8 RD                 CNY                             

9017503  Bearing, teflon, white (5), TR           CNY                             

9017257  BR 8000, Protein Purification Package             CNY                             

QY-x2185 PC-3M 1E8 前列腺癌細胞高轉(zhuǎn)移亞系                                                      

QY-x2186 PC-3M 2B4 前列腺癌細胞低轉(zhuǎn)移亞系                                                      

QY-x2187 PG49 人肺腺癌細胞系                                                       

QY-x2188 PG-BE1 人肺巨細胞癌(PG)的高轉(zhuǎn)移亞系                                                

QY-x2189 PG-LH7 人肺巨細胞癌(PG)的低轉(zhuǎn)移亞系                                                

QY-x2190 RL-952 子宮內(nèi)膜癌細胞株                                                

QY-x2191 SGH44 人腦膠質(zhì)細胞瘤細胞系                                                 

QY-x2192 TJ905 人腦惡性膠質(zhì)瘤細胞系                                                  

QY-x2193 U-373MG 人腦膠質(zhì)瘤細胞系                                                    

QY-x2194 HUVEC 原代 人臍靜脈內(nèi)皮細胞                                                       【肉毒毒素檢測試劑盒】

QY-x2195 Sp2/0 小鼠骨髓瘤細胞系                                                   

QY-x2196 ECV304 正常內(nèi)皮細胞系                                                   

QY-x2197 ACC-M人唾液腺性肺癌高轉(zhuǎn)移細胞                                                   

QY-x2198 HEP2人喉癌細胞                                                 

QY-x2199 H7402 肝癌細胞                                                  

QY-x2200 HEPG2人肝癌細胞                                                       

QY-x2201 PG5人肝癌細胞                                                   

QY-x2202 NCL-H446 人肺癌細胞                                                

QY-x2203 22RV1 人前列腺癌細胞                                                      

QY-x2204 293 人胚腎細胞                                                  

QY-x2205 293T 人胚腎細胞                                                

QY-x2206 2BS 人胚肺成纖維樣細胞                                                  

QY-x2207 311 果蠅胚胎細胞                                                       

QY-x2208 3T3-L1 Swiss albion小鼠脂肪細胞                                              

QY-x2209 3T6 Swiss albion小鼠胚胎成纖維細胞                                               

QY-x2210 801-D 人大細胞肺癌細胞                                                    【肉毒毒素檢測試劑盒】

QY-x2211 A375 人惡性黑色素瘤細胞                                                

QY-x2212 A549 人小細胞肺癌細胞                                                    

QY-x2213 AGS 人胃腺癌細胞                                                      

QY-x2214 Ana-1 小鼠巨噬細胞                                                   

QY-x2215 AtT20 小鼠垂體瘤細胞                                                       

QY-x2216 B16 小鼠黑色素瘤細胞                                                       

QY-x2217 B95-8 絨猴EBV轉(zhuǎn)化的淋巴細胞