【腸平滑肌細(xì)胞總DNA】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【腸平滑肌細(xì)胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【腸平滑肌細(xì)胞總DNA】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染，所以我們會及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【腸平滑肌細(xì)胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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Also includes 4x9013641, BGR Valve 4-port for P1/3 Syringe Pump; 1.5m of 9233214 (listed in Components as qty of 1)." CNY                            【腸平滑肌細(xì)胞總DNA】  

9019668  PCB - Valve, PyroQ24           CNY                                  

9019649  Fuse kit (6.3Ax10, 5Ax5), PyroQ96            CNY                                  

9019602  Home flag, Y-axis, Cx8          CNY                                  

9019599  Housing, filter seal, CX1              CNY                                  

9019585  Slideout electrical tray, QGY         CNY                                  

9019547  Fan guard ａnd filter, Cxx              CNY                                  

9019532  Tip ejector, QGY           CNY                                  

204163    QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (200)    The supplied, ready-to-use ｍaster mix contains SYBR Green I dye, ROX passive reference dye, HotStarTaq DNA Polymerase, ａnd a dNTP mix in an optimized buffer. The dNTP mix includes dUTP, allowing optional treatment with UNG. The UNG enzyme is provided separately. For convenience, the ｍaster mix can be stored at 2–8°C.       CNY                                  

204141    QuantiTect SYBR Green PCR Kit (40)  "Trial kit size for 40 x 50 ul reactions: 1.7 ml QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 2.0 ml RNase-free water

For quantitative, real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using SYBR Green detection."       CNY                                  

9019428  Sensor, source home, RG3           CNY                                  

9019397  Belt, toothed, rotor drive, RG3             CNY                                  

9019350  Heater assembly, element, sensors, RG6             CNY                                  

1027415  FlexiTube siRNA 1 nmol              CNY                                  

9019336  Connector, JP5, Hi, Med, Lo, RG6              CNY                                  

QY-x580  L1210小鼠淋巴細(xì)胞白血病                                   

QY-x581  RBL-1大鼠嗜堿性粒細(xì)胞白血病                                   

QY-x582  MV-1-Lu鼬肺上皮細(xì)胞                                         

QY-x583  NIH3T3小鼠胚胎成纖維細(xì)胞                                        【腸平滑肌細(xì)胞總DNA】

QY-x584  293人胚腎細(xì)胞                                       

QY-x585  L929小鼠成纖維細(xì)胞                                     

QY-x586  293T人胚腎T細(xì)胞                                        

QY-x587  HSC-T6大鼠肝星狀細(xì)胞                                       

QY-x588  GES-1人胃粘膜細(xì)胞                                      

QY-x589  L-02人肝細(xì)胞                                         

QY-x590  Lewis肺癌細(xì)胞                                       

QY-x591  EAC艾氏腹水瘤細(xì)胞                                     

QY-x592  LA795肺腺癌細(xì)胞                                         

QY-x593  S180腹水瘤細(xì)胞                                     

QY-x594  H22肝癌細(xì)胞                                   

QY-x595  B16黑色素瘤細(xì)胞                                   

QY-x596  MPC-83胰腺腺泡癌細(xì)胞                                       

QY-x597  C3白血病細(xì)胞                                        

QY-x598  RIN-m5Fβ胰島素瘤                                      

QY-x599  L1210淋巴白血病細(xì)胞                                    【腸平滑肌細(xì)胞總DNA】

QY-x600  MA891乳腺癌細(xì)胞                                        

QY-x601  TA2自發(fā)高乳腺癌細(xì)胞                                         

QY-x602  SP2/0骨髓瘤細(xì)胞                                   

QY-x603  U14宮頸癌細(xì)胞                                      

QY-x604  YAC-1淋巴瘤細(xì)胞                                   

QY-x605  G422神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞                                    

QY-x606  TC-1HPV16，E6,E7和ras基因共轉(zhuǎn)化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮細(xì)胞                                      

QY-x607  SRA01/04人晶體上皮細(xì)胞系                                        

QY-x608  MCF-7乳腺腺癌細(xì)胞                                     

QY-x609  CNE-1高分化鼻咽癌細(xì)胞                                      

QY-x610  MEF-7/Adr乳腺腺癌阿霉素耐藥株