【乳腺腫瘤組織源性原代細胞總DNA】下面是細胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點：

1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進行操作。

3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。

5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【乳腺腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細胞說明，具體詳細請見細胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【乳腺腫瘤組織源性原代細胞總DNA】五、培養(yǎng)方法

 收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：

 如果細胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細胞已長滿（達 80-90%）。即可進行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2、細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度 80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細胞培養(yǎng)代理品牌

細胞培養(yǎng)代理品牌

【乳腺腫瘤組織源性原代細胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細胞株、原代細胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9020997  ZS Pipetting Module, DCU           CNY                                  

9020909  Cable, UV curly cord, SMC, QGX              CNY                            【乳腺腫瘤組織源性原代細胞總DNA】  

9020908  Hinge, lid, SMC, QGX          CNY                                  

9020643  Waste chute, straight, AS, Cabinet Qsym            CNY                                  

9020632  Kit, hinges (4), Cabinet Qsym              CNY                                  

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9020625  Kit, repair, Cabinet Qsym             CNY                                  

9020332  EPROM - Motherboard, RGQ              CNY                                  

9020233  Foot assembly, rear, CAS             CNY                                  

9020158  Insulation disc - chamber bottom, RG3        CNY                                  

9020096  Locking Pin, TLyser 2          CNY                                  

9020085  Thrust Washer, TLyser         CNY                                  

9239498  V-Housing, LX100         CNY                                  

9239490  EX Laser Driver, Uniphase           CNY                                  

9239390  PCR Plate Adapter, M96        CNY                                  

9236510  BR 3000, PM Service    The Overhaul covers all travel ａnd labor costs plus all necessary parts to perform a Preventative Maintenance,. The instrument will also be thoroughly checked ａnd inspected to determine if any additional parts are required to get the instrument running to its optimal performance. There will be an additional charge for any such parts if any are needed. CNY                                  

9232764  Disposable Troughs, 20 / 30 ml (10)    Troughs holding up to 20 ml of liquid; pack of 10       CNY                                  

9236472  BR 9600, Full Agreement       The Full Agreement 9600 provides full service coverage for the BioRobot 9600. Costs for service visits are fully covered including travel, labor, ａnd parts. The agreement also includes one annual preventive maintenance visit, with costs for labor ａnd parts covered. With a Full Agreement, there is a priority response time of 48 hours (2 working days).       CNY                            【乳腺腫瘤組織源性原代細胞總DNA】  

9236443  BR, Installation       The Installation, BR Universal facilitates the quick implementation of the BioRobot into the lab routine by minimizing the instrument start-up phase. It covers the hardware ａnd software installation of the BioRobot Universal instrument ａnd provides the user with an introductory training on operation ａnd user maintenance. The installation includes labor ａnd travel costs. The performance of the installation process is documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.    CNY                                  

9239155  Assembly, vertical axis, TWI        CNY                                  

9239108  Assy, Sample Needle, Actuator linkage         CNY                                  

9232693  MTP-Plate Holder  2.01              CNY                                  

9232629  Bottle, 500-ml, yellow fitting         CNY                                  

9232602  Vacuum manifold, plate holder bottomless           CNY                                  

9232579  Cooling block, 1,5ml             CNY                                  

9238951  Locking lever, BS15              CNY                                  

9238798  Rectangular bucket, sealable with cap          CNY                                  

9238794  Angle rotor 6 x 250 ml          CNY                                  

9016913  Tubing, press relief valve inlet DISU v2              CNY                                  

9238942  Keyboard-Display assembly, BS15        CNY                                  

9238753  Screwdriver, hex2mm, z-drive BR8             CNY                                  

9238916  Power supply 40W, BS96             CNY                                  

9238748  Coupling, CPC, screw, male, V2          CNY                                  

QY-x154  3T3-Swiss albino胚胎成纖維細胞      CCL-92                              

QY-x155  Mo-MuLv/3T3Mo-MuLv感染的3T3細胞                                    

QY-x156  MRC-5胚肺細胞   CCL-171                                   

QY-x157  WI-38胚肺細胞    CCL-75                              

QY-x158  FRhK-4恒河猴胚腎細胞      CRL-1688                                  【乳腺腫瘤組織源性原代細胞總DNA】

QY-x159  VERO C1008 E6非洲綠猴腎細胞       CRL-1586                                 

QY-x160  Pt K1 NBL-3長鼻袋鼠腎細胞     CCL-35                              

QY-x161  L1210白血病細胞        CCL-219                                   

QY-x162  Neuro-2A腦神經(jīng)瘤細胞      CCL-131                                   

QY-x163  PC-12腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞    CRL-1721                                 

QY-x164  HeLa宮頸癌細胞                                     

QY-x165  A549 [A-549]肺癌細胞        CCL-185                                   

QY-x166  MCF7乳腺癌細胞        HTB-22                              

QY-x167  Hep 3B2.1-7肝癌細胞   HB-8064                             

QY-x168  MDA-MB-231乳腺癌細胞   HTB-26                              

QY-x169  Hep G2肝癌細胞   HB-8065                             

QY-x170  HCT 116結(jié)腸癌細胞    CCL-247                                   

QY-x171  22RV1前列腺癌細胞    CRL-2505                                 

QY-x172  HT-29結(jié)腸癌細胞        HTB-38                              

QY-x173  KG-1白血病細胞  CCL-246                                   

QY-x174  LoVo結(jié)腸癌細胞   CCL-229                                    【乳腺腫瘤組織源性原代細胞總DNA】

QY-x175  THP-1單核細胞白血病       TIB-202                             

QY-x176  SW620結(jié)腸癌細胞      CCL-227                                   

QY-x177  SK-N-SH神經(jīng)母細胞瘤細胞       HTB-11                              

QY-x178  SH-SY5Y神經(jīng)母細胞瘤細胞       CRL-2266                                 

QY-x179  COLO 205結(jié)腸癌細胞        CCL-222                                   

QY-x180  T/G HA-VSMC人主動脈血管平滑肌細胞  CRL-1999                                 

QY-x181  HUVEC人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞  CRL-1730                                 

QY-x182  A10大鼠主動脈血管平滑肌細胞        CRL-1476                                 

QY-x183  3T3-L1小鼠脂肪細胞   CL-173                              

QY-x184  A9皮下結(jié)締組織細胞  CRL-1811