【嬰兒真皮成纖維細(xì)胞總DNA】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無(wú)菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無(wú)菌室和無(wú)菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并且打開無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無(wú)菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)在臺(tái)面的中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來(lái)自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無(wú)菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【嬰兒真皮成纖維細(xì)胞總DNA】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說(shuō)明，具體詳細(xì)請(qǐng)見細(xì)胞附帶說(shuō)明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長(zhǎng)方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【嬰兒真皮成纖維細(xì)胞總DNA】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：

 如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶?jī)?nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問(wèn)題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【嬰兒真皮成纖維細(xì)胞總DNA】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

931436QIAsymphony Investigator Kit (192)CNY

133243NeXtalStock Sodium malonate pH 5.0 (200)CNY

330602RT² SYBR Green FAST Mastermix (12)CNY

330520RT² SYBR Green ROX qPCR Mastermix (2)CNY

9010637Raised Pipetting Position for P7, sCNY

211454QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit (400)CNY

211033QuantiTect Virus +ROX Vial Kit (200)CNY

210215QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (1000)CNY

9012760Magnetic Stirrer, 2 positionCNY

800201Single Read HT, w/ prepCNY

800176Easy-Read Plates, w/o prep"Sequencing of plasmid DNA or PCR products 

DNA quality control not included

No repetition of sequencing

Data collected to maximal read length

Minimum order at least 96 reads

One primer per plate"CNY

800090Ready-Run Rxns.CNY

765312PAXgene TissueFIX Cont. (50 ml) KitCNY

132009EasyXtal 15-Well Tool X-Seal (100)"100 empty 15-well crystallization plates with X-Seal crystallization supports (5 boxes of 20)

For manual setup of hanging ｄrop crystallization experiments."CNY

762931Buffer BM3 Wash buffer 8 x 150 ml conc.CNY

204054QuantiFast SYBR Green PCR Kit (400)CNY

203741QIAGEN Fast Cycling PCR Kit (50)"Trial Kit: For 50 x 20 µl reactions: 1 x 0.5 ml Fast Cycling Master Mix (2x), RNase-free water, 10 x CoralLoad Fast Cycling Dye, 5 x Q-Solution

-to be used as sample Kit"CNY

159340Sterile Foam-Tipped Swabs (100)CNY

158906Cell Lysis Solution (125 ml)CNY

35061Ni-NTA HisSorb Plates (5)5 Ni-NTA-coated, transparent 96-well platesCNY

678891ipsogen MLL-DUP e2e8 StandardsCNY

678591ipsogen MLL-AF9 e8e10 StandardsCNY

678191ipsogen MLL-AF4 e10e4 StandardsCNY

34460Penta.His HRP Conjugate Kit125 ul Penta-His HRP Conjugate, 5 g Blocking Reagent, 50 ml Blocking Reagent Buffer (10x concentrate)CNY

32746EasyXpress Linear Template Fab Kit (100)CNY

32501EasyXpress Protein Synthesis Kit (5)"- Kit for cell-free protein expression in E.coli cell-free extracts. 

- The same as the EasyXpress Protein Synthesis Kit (20) (former EasyXpress Protein Synthesis Mini Kit), but only 5 instead of 20 reactions

- Ideal for testing ａnd expression of QIAgenes"CNY

30900Glutathione HiCap Matrix (10 ml)CNY

28181QIAquick 96 PCR Purification Kit (4)For purification of 4 x 96 PCR reactions: 4 QIAquick 96 Plates, Buffers, Collection Microtubes (1.2 ml), CapsCNY