1）不可逆的生長停滯，細(xì)胞體積變大；

2）與衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal）的活化。

作為溶酶體內(nèi)的水解酶，通常在pH 4.0的條件下表現(xiàn)活性。但是衰老細(xì)胞內(nèi)SA-β-gal在pH 6.0的條件下表現(xiàn)活性，且隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞群體中表現(xiàn)衰老相關(guān)的SA-β-gal的細(xì)胞數(shù)目逐漸增加。

艾美捷細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒提供了一種易于使用和有效的方法來確定細(xì)胞

衰老。SA-β-半乳糖苷酶催化X-gal的水解，產(chǎn)生藍(lán)色。每個(gè)試劑盒提供足夠的量在35毫米培養(yǎng)皿中進(jìn)行多達(dá)50次檢測(cè)。

艾美捷細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒套件組件：

1.100X固定液（部件號(hào)40010）：一個(gè)試管–1.5 mL 25%戊二醛

2.染色溶液A（部件號(hào)40011）：一管-1.5ml 500mM亞鐵氰丨化鉀

3.染色溶液B（部件號(hào)40012）：一個(gè)試管–1.5 mL 500 mM鐵氰丨化鉀

4.染色溶液C（部件號(hào)40015）：一瓶-4.5mL 1M檸檬酸鹽-Na 2 HPO 4緩沖液，pH

6，50毫米MgCl 2

5.染色溶液D（部件號(hào)40016）：一瓶-4.0ml 5M NaCl

6.X-gal溶液（部件號(hào)40014）：兩個(gè)試管-每個(gè)試管中DMF中1.5 mL 40 mg/mL X-gal

艾美捷細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒分析方案（35mm皿）：

1.從表達(dá)SA-ß-Gal的衰老細(xì)胞中吸出培養(yǎng)基。

2.用3 mL 1X PBS洗滌細(xì)胞兩次，并吸出終洗滌液。

3.加入2mL 1X固定溶液。在室溫下孵育5分鐘。

4.取出固定溶液，用3mL 1X PBS洗滌固定細(xì)胞三次。

5.吸入后一次洗滌液，并通過添加2 mL新鮮制備的細(xì)胞完全覆蓋細(xì)胞染色工作溶液。

6.在37ºC避光條件下培養(yǎng)細(xì)胞4小時(shí)至過夜。

7.取出細(xì)胞染色工作溶液，然后用3 mL 1X洗滌染色細(xì)胞兩次PBS并將細(xì)胞儲(chǔ)存在1X PBS中。對(duì)于長期儲(chǔ)存，用1X PBS覆蓋細(xì)胞20%甘油。儲(chǔ)存在4ºC。

注：通過將染色樣品與DMSO。

8. 使用光學(xué)顯微鏡計(jì)數(shù)藍(lán)色染色的衰老細(xì)胞。

部分引用文獻(xiàn)：

1. Huang, Y. et al. (2022). The impact of senescence on muscle wasting in chronic kidney disease. J

Cachexia Sarcopenia Muscle. doi: 10.1002/jcsm.13112.

2. Sanagawa, A. et al. (2022). Effect of Replicative Senescence on the Expression ａnd Function of

Transporters in Human Proximal Renal Tubular Epithelial Cells. Biol Pharm Bull. 45(11):1636-

1643. doi: 10.1248/bpb.b22-00322.

3. Okawa, R. et al. (2022). The effects of continuous exposure to low-dose chlorine dioxide gas on

the characteristics of induced pluripotent stem cells. Regen Ther. 21:250-257. doi:

10.1016/j.reth.2022.07.014.

來源：https://www.amyjet.com/products/CBA-230.shtml