使用說(shuō)明書(shū)

試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被白蛋白（ALB）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

標(biāo)記：良好的酶結(jié)合物取決于兩個(gè)條件：即價(jià)的和高活性的酶。的活性和純度對(duì)制備標(biāo)記至關(guān)重要，因?yàn)樘胤磻?yīng)隨活性和純度的而增強(qiáng)。在酶標(biāo)記中，的活性有所，故需要純度高、效及抗原親和力強(qiáng)的球蛋白使用親和層析提純的，可性，而且可稀釋使用，非特吸附。

樣品收集、處理及保存

2.  ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

4.  組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

3. 37℃恒溫箱

競(jìng)爭(zhēng)ELISA：此法主要用于測(cè)定小分子抗原及半抗原，其原理類(lèi)似于放射測(cè)定。其基本程序?yàn)椋孩?包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原（對(duì)照孔僅加酶標(biāo)抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液④ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量由酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來(lái)確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標(biāo)記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點(diǎn)在于快速、特高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測(cè)；其主要不足在于每種抗原都要進(jìn)行酶標(biāo)記，而且因?yàn)榭乖慕Y(jié)構(gòu)不同，還需應(yīng)用不同的結(jié)合。此外，試驗(yàn)中應(yīng)用酶標(biāo)抗原的量較多。

雞嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員12(EAR12)ELISA試劑盒

操作注意事項(xiàng)

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

4.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

試劑的

洗板

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

5.  棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

 繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

競(jìng)爭(zhēng)ELISA：此法主要用于測(cè)定小分子抗原及半抗原，其原理類(lèi)似于放射測(cè)定。其基本程序?yàn)椋孩?包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原（對(duì)照孔僅加酶標(biāo)抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液④ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量由酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來(lái)確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標(biāo)記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點(diǎn)在于快速、特高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測(cè)；其主要不足在于每種抗原都要進(jìn)行酶標(biāo)記，而且因?yàn)榭乖慕Y(jié)構(gòu)不同，還需應(yīng)用不同的結(jié)合。此外，試驗(yàn)中應(yīng)用酶標(biāo)抗原的量較多。

試劑盒性能

2.  靈敏度檢測(cè)濃度小于1.0 mg/mL。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

6.  有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

2.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司