中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

肉與肉制品 膽固醇含量測定

Meatmeat products-Method for determination of cholesterol

 1 主題內(nèi)容與適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了肉與肉制品中膽固醇含量的測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于肉與肉制品中膽固醇含量的測定。

2 引用標(biāo)準(zhǔn)

GB 9695.1 肉與肉制品 游離脂肪含量的測定

3 原理

肉與肉制品中的脂類經(jīng)皂化后,膽固醇作為不皂化物被提取出來,并與一定量的內(nèi)標(biāo)物

混合后一起注入氣相色譜柱,求出膽固醇與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比,根據(jù)工作曲線計算膽固醇的

重量,以求得肉與肉制品中膽固醇含量。

4 試劑

所用水均為蒸餾水或相當(dāng)純度的水。

4.1 無水乙醚。

4.2 氯仿(GB 682)。

4.3 1 mol/L氫氧化鉀(GB 2306)/乙醇(GB 678)溶液。

4.4 無水硫酸鈉。

4.5 膽固醇:1.0mg/mL氯仿溶液。

4.6 內(nèi)標(biāo)溶液:

4.6.1 5-α膽甾烷/氯仿標(biāo)準(zhǔn)溶液:1.0mg/mL。

4.6.2 菜油醇/氯仿標(biāo)準(zhǔn)溶液:3.0mg/mL。

4.6.3 膽固醇與5-α膽甾烷混合液:上述兩種標(biāo)準(zhǔn)液等體積混合。

5 儀器和設(shè)備

5.1 實驗室常規(guī)儀器。

5.2 氣相色譜儀,配有FID檢測器。

6 試樣

按照GB 9695.1得到的脂肪。

7 分析步驟

7.1 不皂化物的提取

稱取1.00g脂肪,置于10mL容量瓶中用氯仿定容并搖勻。準(zhǔn)確量取該試液1～5mL、置于25mL具塞試管中,準(zhǔn)確加入0.5～1mL內(nèi)標(biāo)物溶液(4.6.1),然后將氯仿蒸干。加入1mol/L氫氧化鉀溶液5mL,裝上冷凝管,在85～95℃水浴上緩緩皂化1h。取下冷卻至室溫，全部移入50mL分液漏斗中,用水10mL洗具塞試管,洗液并入分液漏斗,加乙醚10mL輕輕振搖,靜置分層后,將水相放入原試管中,加乙醚10mL振搖,待分層后,將乙醚移入分液漏斗內(nèi)。再用10mL乙醚提取一次,此時分液漏斗中共有30mL溶液。用水2～3mL洗滌乙醚液,分層后,棄去水相,用無水硫酸鈉10g干燥后,將乙醚層移入另一具塞試管中,通氮氣吹干后,加入乙醇1mL。

7.2 色譜條件

7.2.1 色譜分離條件選擇:對膽固醇峰要求其理論塔板數(shù)不少于1 600;膽固醇與菜油醇二

者峰分辨率不小于2.2;膽固醇的保留時間在8～12min之間;膽固醇峰強度為滿量程的0.25～0.5。

7.2.2 2％OV-1/chromosorb W(60～80目)φ3mm×2m。

7.2.3 柱溫:260℃。

7.2.4 進(jìn)樣口及檢測器溫度:300℃。

7.2.5 載氣(高純氮)流速:60mL/min。

7.3 工作曲線制作

7.3.1 不同配比的膽固醇與5-α膽甾烷混合標(biāo)準(zhǔn)液:

以表中所列舉的不同組合的膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液和5-α膽甾烷混合樣品置于具塞試管中,將溶劑通氮氣吹干后,加入1 mL乙醇,取1～3μL注入色譜柱中。

從所得到氣相色譜圖求出膽固醇和5-α膽甾烷各峰的面積比，以峰面積比為縱坐標(biāo)，質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，制作工作曲線，此線斜率的倒數(shù)為K值。

7.3.2 試樣的氣相色譜分析。

8 分析結(jié)果的計算

式中:X——樣品中膽固醇含量,mg/100g;

A1——膽固醇的峰面積;

A2——5-a膽甾烷的峰面積;

k——由工作曲線求得的膽固醇和5-a膽甾烷的質(zhì)量比與峰面積比的比值;

Wt——脂類試樣中添加的內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量,mg;

fat％——樣品中脂肪的含量；

W——脂肪質(zhì)量,g 。

當(dāng)符合允許差的要求時,取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果,精確至0.1mg/100g。

9 允許差

同一分析者同時或相繼兩次測定結(jié)果之差不得超過平均值的10％。

附加說明:

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國商業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由中國肉類食品綜合研究中心歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由中國肉類食品綜合研究中心負(fù)責(zé)起草。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人魯紅軍、劉小東、蒲健