步：選擇抗體。

三種二抗抗體：Whole IgG，F(xiàn)(ab&；rsquo；)2片段，F(xiàn)ab片段。

Whole IgG抗體適用于多數(shù)情況，是性價(jià)比的。Whole IgG是完整的抗體分子，有一個(gè)Fc部分和兩個(gè)與抗原結(jié)合的Fab部分 (Figure 1, Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc網(wǎng)站)。

F(ab&；rsquo；)2片段抗體是胃蛋白酶消化IgG除去Fc部分，剩下靠二硫鍵連接的結(jié)合抗原的兩個(gè)Fab部分。F(ab&；rsquo；)2片段抗體用在避免抗體與Protain A 或G結(jié)合，或者與有Fc受體的活細(xì)胞結(jié)合。如果一抗是完整的抗體分子，不管二抗是哪種形式都可能結(jié)合Fc受體。

Fab片段抗體是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的。這些抗體只含有一個(gè)Fab結(jié)合位點(diǎn)。它們用來封閉內(nèi)源性的免疫球蛋白，或者在使用相同物種來源的一抗多標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)中封閉暴露的免疫球蛋白。

第二步：一抗的物種來源。

為了正確的選擇二抗，必須知道一抗的物種來源。如果一抗是小鼠來源的，就找&；ldquo；anti-mouse&；rdquo；。

第三步：選擇二抗的物種來源。

第四步：選擇二抗的特異性。

因?yàn)椴煌锓N來源的免疫球蛋白含有相似的結(jié)構(gòu)，抗一個(gè)物種的抗體可能與其他物種發(fā)生交叉反應(yīng)，除非事先特殊處理過(如標(biāo)有&；ldquo；min X Hu, Bov&；hellip；Sr Prot&；rdquo； - minimal cross-reactivity to human ａnd bovine serum proteins) ), 經(jīng)過用圓括號中的物種 (human, bovine) 的血清蛋白的吸附處理來降低交叉反應(yīng))。在選擇二抗時(shí)，只有在來自兩個(gè)很相近的物種的一抗都存在而需要檢測其中一種時(shí)，才使用針對其中一種特殊吸附處理過的抗體。這樣的抗體可能不能和所有亞型的IgG都很好的反應(yīng)。比如，在含有內(nèi)源性免疫球蛋白的大鼠的組織樣本中，使用針對大鼠吸附處理過的anti-mouse IgG來檢測小鼠的一抗，或者在多標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中使用了大鼠的一抗時(shí)。當(dāng)不含有大鼠免疫球蛋白時(shí)，采用沒有針對大鼠IgG處理過的anti-mouse二抗來檢測小鼠的一抗。牛血清白蛋白（BSA）和奶粉中可能含有牛IgG。直接針對牛，山羊，馬和綿羊的二抗會(huì)跟牛IgG反應(yīng)。因此，使用BSA或者奶粉來封閉或者稀釋這些抗體可能導(dǎo)致背景染色明顯增加，以及抗體效價(jià)的降低。這時(shí)，推薦使用5％的二抗來源物種的正常血清來封閉。

Anti-IgG (H+L)這類抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈[比如Fc和F(ab&；rsquo；)2/Fab部分]都可以反應(yīng)。也可以和其他的免疫球蛋白家族（比如IgM和IgA）反應(yīng)，因?yàn)樗械拿庖咔虻鞍锥加邢嗤妮p鏈（&；kappa；鏈或者&；lambda；鏈）。Anti-IgG (H+L) 比只抗片段的抗體識(shí)別更多的抗原表位。

Anti-IgG，F(xiàn)c fragment specific這類抗體和IgG重鏈的Fc部分反應(yīng)。它們通過了ELISA檢測，和(或)針對Fab片段吸附的測試。某些情況下，需要額外檢測和處理來降低和IgM或IgA的交叉反應(yīng)，會(huì)被描述為&；ldquo；Anti-IgG, Fc&；gamma；fragment specific&；rdquo；。注意：不是所有anti-IgG, Fc抗體和所有亞型的IgG反應(yīng)能力一致。要找和四種IgG亞類反應(yīng)能力差不多的anti-mouse IgG, Fc&；gamma；抗體的話，應(yīng)當(dāng)選Goat Anti-Mouse IgG (subclasses 1+2a+2b+3), Fc&；gamma；fragment specific (min X Hu,Bov,Rb Sr Prot)。

Anti-IgG，F(xiàn)c&；gamma； Subclass specific抗體分別和不同的小鼠IgG亞型重鏈的Fc部分反應(yīng)。這類抗體經(jīng)過ELISA和/或針對Fab片段、IgM和其他小鼠IgG亞型的吸附測試。

Anti-IgG，F(xiàn)(ab&；rsquo；)2 fragment specific和IgG的F(ab&；rsquo；)2/Fab部分反應(yīng)。這類抗體經(jīng)過了ELISA和/或Fc片段的吸附檢測。因?yàn)楹洼p鏈反應(yīng)，它們同時(shí)也和具有相同輕鏈的其他種類的免疫球蛋白反應(yīng)（如IgM和IgA）。

(min X&；hellip；Sr Prot)這類抗體經(jīng)過了檢測，以及針對IgG和圓括號中的物種的血清蛋白的吸附處理。當(dāng)其他物種免疫球蛋白的出現(xiàn)可能導(dǎo)致交叉反應(yīng)時(shí)，推薦使用這類抗體。但是，當(dāng)要選擇經(jīng)過針對相近物種吸附處理的抗體時(shí)，要特別注意，因?yàn)樗鼈兡茏R(shí)別的表位數(shù)量大大減小了，可能識(shí)別單抗的能力很弱。這種情況的例子有Anti-Mouse IgG (min X Rat,&；hellip；.Sr Prot), Anti-Rat IgG (min X Mouse, &；hellip；Sr Prot), 和 Anti-Ramenian Hamster IgG (min X Mouse, Rat, &；hellip；Sr Prot)。

ML （Multiple Labeling多標(biāo)記實(shí)驗(yàn)）: 有些抗體標(biāo)明了ML，來強(qiáng)調(diào)它們除了可以用于單標(biāo)，還可用于多標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。

第五步：選擇需要的探針。

第六步：選擇的抗體的規(guī)格、價(jià)錢和目錄號。

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α-輔肌動(dòng)蛋白4抗體應(yīng)注意的問題：

1、包被抗體或抗原不適，易產(chǎn)生陽性值較小，或產(chǎn)生變異，即跳管現(xiàn)象。

2、用抗血清不純化，或純化程度太低的抗體包被，則陽性值較小，或沒有陽性梯度。

3、封閉不好或標(biāo)記物過濃可產(chǎn)生對照較高。

抗體規(guī)律

（1）初次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)抗原次進(jìn)入機(jī)體時(shí)，需經(jīng)一定的潛伏期才能產(chǎn)生抗體，且抗體產(chǎn)生的量也不多，在體內(nèi)維持的時(shí)間也較短。

（2）再次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)相同抗原第二次進(jìn)入機(jī)體后，開始時(shí)，由于原有抗體中的一部分與再次進(jìn)入的抗原結(jié)合，可使原有抗體量略為降低。隨后，抗體效價(jià)迅速大量增加，可比初次反應(yīng)產(chǎn)生的多幾倍到幾十倍，在體內(nèi)留存的時(shí)間亦較長。

（3）回憶反應(yīng)產(chǎn)生抗體：由抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體，經(jīng)過一定時(shí)間后可逐漸消失。此時(shí)若再次接觸抗原，可使已消失的抗體快速上升。如再次刺激機(jī)體的抗原與初次相同，則稱為特異性回憶反應(yīng)；若與初次反應(yīng)不同，則稱為非特異性回憶反應(yīng)。非特異性回憶反應(yīng)引起的抗體的上升是暫時(shí)性的，短時(shí)間內(nèi)即很快下降。

主要經(jīng)營進(jìn)口原裝抗體、進(jìn)口分裝抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、單標(biāo)抗體、雙標(biāo)抗體、多標(biāo)抗體、一抗、二抗；免疫組化抗體、免疫熒光抗體、流式細(xì)胞抗體、免疫細(xì)胞化學(xué)抗體。