細胞能夠從周圍環(huán)境中攝取DNA分子，并且不易被細胞內(nèi)的限制性核酸內(nèi)切酶分解時所處的一種特殊生理狀態(tài)稱感受態(tài)（competence）。自然環(huán)境中細菌可以吸收外源遺傳物質(zhì)以增加自身對環(huán)境的適應(yīng)性。人工感受態(tài)的形成， 需要低溫和鈣處理，這樣可能破壞了細胞膜上的脂質(zhì)陣列 ，Ca2 +與膜上的多聚羥基丁酸化合物、多聚無機磷酸形成復(fù)合物利于外源DNA 的滲入， 外部理化因素促進了感受態(tài)的形成   。


   上海淳麥生物科技有限公司在感受態(tài)細胞的研發(fā)面，實力雄厚，擁有了克隆、表達、酵母、發(fā)根和農(nóng)桿菌5大類，共計百余種感受態(tài)細胞。在電擊感受態(tài)面，擁有了大腸桿菌 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類，極大提高了客戶在轉(zhuǎn)基因以及文庫構(gòu)建面的成功率。


 


 


 JM110感受態(tài)細胞簡要說明：


 CMbio JM110菌株具有硫酸鏈霉素抗性(StrR) ；是甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，提取得到的質(zhì)粒DNA，可被對dam、dcm甲基化敏感的內(nèi)切酶切割； lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以進行藍白斑篩選，淳麥生物科技,四川感受態(tài)細胞廠家電話,上海淳麥生物科技有限公司，但轉(zhuǎn)化效率不高，CMbio High5TM系列JM110感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制纟作，經(jīng)pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率約107 cfu/μg。一般不用于質(zhì)粒廾構(gòu)建，只適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。


 


 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞操作說明：


 1. 0.2cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。


 2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5ug質(zhì)粒DNA（質(zhì)粒體積不大于6ul，應(yīng)該用試劑盒抽提，雙蒸水溶解），用手輕輕敲打管底混勻，立即插入冰中，用200ul槍頭將感受態(tài)-質(zhì)�；旌衔锟焖僖频诫姄舯�，蓋上杯蓋，空管保留待用。


 3.啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此參數(shù)為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，淳麥生物科技,四川感受態(tài)細胞廠家電話,上海淳麥生物科技有限公司，電擊完成快速插入冰中，加入700ul 無抗生素的LB并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。


 4. 6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天（當平板只含有50ug/ml kan 時，28℃培養(yǎng)48h即可；平板中同時加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h）。


 


 


 


 


 

 感受態(tài)細胞操作說明：


 1、CMbio感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。


 2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。


 5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


 


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