產(chǎn)品展示
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞詳細(xì)說(shuō)明
點(diǎn)擊次數(shù)：92發(fā)布時(shí)間：2017/12/5 13:27:21
更新日期：2020/1/10 12:05:03
所 在 地：中國(guó)大陸
產(chǎn)品型號(hào)：
相關(guān)標(biāo)簽：BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞 (DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞
優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細(xì)內(nèi)容
中文名： BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格：10×100ul
分類：感受態(tài)制備
保存：—20℃,12個(gè)月
用途：基因克隆表達(dá)
說(shuō)明：BL21(DE3)pLysS受體菌含有表達(dá)T7溶菌酶的基因,適合毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞詳細(xì)說(shuō)明：
BL21(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)，適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)。BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108 cfu/µg DNA。
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞操作流程：
1. BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入 目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm 復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含 34 µg/ml氯霉素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
6.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的 SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
7.待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
公司介紹：
遠(yuǎn)慕生物現(xiàn)貨供應(yīng)進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品，動(dòng)物血清血漿，質(zhì)粒載體，質(zhì)粒提取試劑盒，金標(biāo)檢測(cè)試劑盒，培養(yǎng)基，抗體，染色液，溶液，抗生素，抗生素， 維生素，有機(jī)試劑，無(wú)機(jī)試劑，環(huán)保試劑，化學(xué)試劑，生化試劑，實(shí)驗(yàn)耗材，液體試劑，細(xì)胞培養(yǎng)，其他科研試劑等，提供ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，品種齊全，了解更多試劑詳情請(qǐng)來(lái)電洽談！
6. BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒，除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無(wú)抗生素外，其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素，以防質(zhì)粒丟失。
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞操作流程：
1. BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入 目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm 復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含 34 µg/ml氯霉素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
6.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的 SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
7.待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
公司介紹：
遠(yuǎn)慕生物現(xiàn)貨供應(yīng)進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品，動(dòng)物血清血漿，質(zhì)粒載體，質(zhì)粒提取試劑盒，金標(biāo)檢測(cè)試劑盒，培養(yǎng)基，抗體，染色液，溶液，抗生素，抗生素， 維生素，有機(jī)試劑，無(wú)機(jī)試劑，環(huán)保試劑，化學(xué)試劑，生化試劑，實(shí)驗(yàn)耗材，液體試劑，細(xì)胞培養(yǎng)，其他科研試劑等，提供ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，品種齊全，了解更多試劑詳情請(qǐng)來(lái)電洽談！
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：
1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�？上鄳�(yīng)減少*終用于涂板的菌量。
4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。
5. 為獲得需要量的蛋白，*佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。
1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�？上鄳�(yīng)減少*終用于涂板的菌量。
4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。
5. 為獲得需要量的蛋白，*佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。
6. BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒，除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無(wú)抗生素外，其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素，以防質(zhì)粒丟失。
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)呂如下：
DH5α受體菌
DH5α受體菌
DH5α感受態(tài)細(xì)胞
BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
瓊脂結(jié)冷膠混合物｜植物凝膠
瓊脂結(jié)冷膠混合物｜植物凝膠
BL21(DE3)受體菌
BL21(DE3)pLysS受體菌
BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞
HB101受體菌
HB101受體菌
HB101感受態(tài)細(xì)胞
JM109感受態(tài)細(xì)胞
JM109受體菌
Top10感受態(tài)細(xì)胞
細(xì)胞松弛素B儲(chǔ)存液（Cytochalasin B,1mg/ml）
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Top10受體菌
Rossita感受態(tài)細(xì)胞
轉(zhuǎn)化儲(chǔ)存液(2×TSS,pH6.5)
磷酸緩沖鹽溶液（10×PBS,無(wú)鈣鎂）
磷酸緩沖鹽溶液（10×PBS,無(wú)鈣鎂）
