DNA中的5-甲基胞嘧啶（5-mC）通過(guò)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶在胞嘧啶環(huán)的5個(gè)碳原子上共價(jià)加成甲基而產(chǎn)生。這個(gè)過(guò)程已經(jīng)被充分研究，并且通常與基因表達(dá)的抑制有關(guān)。還觀察到在人類中，5-mC存在于各種RNA分子中，包括tRNA，rRNA，mRNA和非編碼RNA（ncRNA）。5-mC似乎在某些類別的ncRNA中富集，但在mRNA中相對(duì)耗竭。5-mC的水平在動(dòng)物基因組中是可變的，范圍從某些昆蟲(chóng)中無(wú)法檢測(cè)到的量到人類細(xì)胞中總RNA的約0.1-0.45％。在mRNA中發(fā)現(xiàn)了大多數(shù)的5-mC位點(diǎn)（83％）。在這些轉(zhuǎn)錄物中，5-mC似乎在蛋白質(zhì)編碼序列中被耗盡，但富含5＇和3＇UTR。兩種不同的甲基轉(zhuǎn)移酶 已知NSUN2和Dnmt2催化真核RNA中的5-mC修飾。有強(qiáng)有力的證據(jù)表明，RNA胞嘧啶甲基化會(huì)影響各種生物學(xué)過(guò)程的調(diào)控，例如RNA穩(wěn)定性和mRNA翻譯。

艾美捷MethylFlash總5-mC RNA甲基化定量分析試劑盒包含 5-mC RNA 甲基化定量實(shí)驗(yàn)所需的所有佳化試劑，可以使用任何物種的 total RNA 樣品來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如哺乳動(dòng)物、植物、真菌、細(xì)菌和病毒等，無(wú)論是從培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮或冷凍的組織、血漿/血清或體液等來(lái)源皆可適用。  

總5-mC RNA甲基化定量分析試劑盒的原理和步驟：

該試劑盒包含所有用于定量5-mC RNA甲基化的試劑。在測(cè)定中，RNA結(jié)合到經(jīng)過(guò)特殊處理以具有高核酸親和力的條帶孔上。使用捕獲和檢測(cè)抗體檢測(cè)RNA中的5 mC，然后通過(guò)在微孔板分光光度計(jì)中讀取熒光進(jìn)行熒光定量。5-mC RNA的百分比與測(cè)得的熒光強(qiáng)度成正比。

總5-mC RNA甲基化定量分析試劑盒用戶指南：

用途：MethylFlash™ 5-mC RNA甲基化ELISA簡(jiǎn)易試劑盒（熒光法）適用于使用從任何物種分離的總RNA檢測(cè)全球5-mC RNA甲基化水平，包括各種形式的哺乳動(dòng)物、植物、真菌、細(xì)菌和病毒，包括但不限于培養(yǎng)的細(xì)胞、新鮮和冷凍組織、血漿/血清樣本和體液樣本等。

輸入RNA：每次測(cè)定的RNA量可以為50至300 ng。對(duì)于理想的定量，輸入的RNA量應(yīng)為200納克，因?yàn)?span style="font-family: Calibri;">RNA中的5-mC因組織而異，可能更少在某些物種中占總RNA的0.1%以上。

起始材料：起始材料可以包括各種組織或細(xì)胞樣本，例如培養(yǎng)的細(xì)胞、新鮮和冷凍組織、血漿/血清樣品、體液樣品，等。

內(nèi)部對(duì)照：本試劑盒中提供了陰性和陽(yáng)性RNA對(duì)照。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以進(jìn)行（范圍：0.05%至2%）。由于RNA中的全局5-mC可因組織而異，從正常和患病狀態(tài)，建議運(yùn)行重復(fù)樣本，以確保信號(hào)生成的驗(yàn)證。該試劑盒將允許用戶量化RNA中5-mC的絕丨對(duì)量確定兩個(gè)不同RNA樣品的相對(duì)5-mC狀態(tài)。

注意事項(xiàng)：為避免交叉污染，請(qǐng)小心地將樣品或溶液移到帶狀孔中。使用氣溶膠屏障移液管吸頭，并始終在液體轉(zhuǎn)移之間更換移液管的吸頭。穿在整個(gè)過(guò)程中戴手套。如果手套與樣品接觸，更換手套立即。

艾美捷MethylFlash總5-mC RNA甲基化定量分析試劑盒原則和程序：

圖1：佳標(biāo)準(zhǔn)曲線示例用5-mC標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照產(chǎn)生。 

圖2：準(zhǔn)確定量各種使用MethylFlash 5-mC RNA甲基化ELISA簡(jiǎn)易套件（熒光計(jì)）。結(jié)果密切相關(guān)與通過(guò)MS-LC獲得的那些相同。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/featured/5-mc-rna.shtml