艾美捷膽固醇熒光測定試劑盒為血清和血漿中膽固醇的敏感定量提供了一種簡單的熒光測定方法。該測定基于檢測游離膽固醇和膽固醇酯的酶偶聯(lián)反應(yīng)，如下圖1所示。膽固醇酯被膽固醇酯酶水解成膽固醇，然后被膽固醇氧化酶氧化，生成過氧化氫和相應(yīng)的酮產(chǎn)物。然后使用10-乙酰基-3,7-二羥基苯惡嗪（ADHP）檢測過氧化氫，這是一種高度靈敏和穩(wěn)定的過氧化氫探針。在辣根過氧化物酶的存在下，ADHP與過氧化氫以1:1的化學(xué)計量比反應(yīng)，產(chǎn)生高度熒光的間苯二酚。

艾美捷膽固醇熒光測定試劑盒試劑準(zhǔn)備：

1.膽固醇測定緩沖液（10X）-（編號10008052）

用27 ml HPLC水稀釋3 ml測定緩沖液濃縮液。該終測定緩沖液（100mM磷酸鉀，pH 7.4，含50mM氯化鈉和5mM膽酸）應(yīng)用于制備標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋樣品。如果在室溫或4°C下儲存，稀釋的測定緩沖液應(yīng)至少穩(wěn)定一周。

2.膽固醇含量測定標(biāo)準(zhǔn)-（編號10008053）

小瓶中含有10mM乙醇膽固醇（5-膽甾-3β-醇）。該試劑可用于制備稀釋膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品。

3.膽固醇測定檢測器（編號10008054）

小瓶中含有ADHP凍干粉。在加入測定雞尾酒之（參見第13頁第4步的測定），用100µl DMSO（項目號700001）和100µl HPLC水重新構(gòu)建膽固醇檢測器。重組膽固醇檢測器應(yīng)為穩(wěn)定的HPLC水。重組膽固醇檢測儀應(yīng)穩(wěn)定。

4.膽固醇測定辣根過氧化物酶（HRP）-（編號10008055）

小瓶中含有HRP凍干粉。每個小瓶用200µl重新配制1個，每個小瓶用1 ml HPLC水重新配制5個。當(dāng)儲存在-20°C。在冷凍之，將每個小瓶中的5個等分為較小的等分，以便避免重復(fù)冷凍/解凍循環(huán)。

5.膽固醇測定氧化酶-（編號10008056）

小瓶中含有膽固醇氧化酶凍干粉。用100µl的HPLC水重新配制每個小瓶1個，用500µl的高效液相色譜水重新調(diào)配每個小瓶5個。當(dāng)在-20°C下儲存時，重組試劑應(yīng)至少穩(wěn)定一周。在冷凍之，將每個小瓶中的5個等分為較小的等分，以避免重復(fù)的冷凍/解凍循環(huán)。

6.膽固醇測定酯酶-（編號10008057）

小瓶中含有膽固醇酯酶凍干粉。用50µl重新配制1個小瓶，用250µl HPLC水重新配制5個小瓶。當(dāng)在-20°C下儲存時，重組試劑應(yīng)至少穩(wěn)定一周。在冷凍之，將每個小瓶中的5個等分為較小的等分，以避免重復(fù)的冷凍/解凍循環(huán)。

7.二甲基亞砜測定試劑-（編號700001）

小瓶中含有DMSO。試劑已準(zhǔn)備好使用。

艾美捷膽固醇熒光測定試劑盒樣品制備：

血漿

通常，人血漿中的膽固醇水平在2.5-7.5mM5-7的范圍內(nèi)

1.使用抗凝劑如肝素、EDTA或檸檬酸鹽采集血液。

2.在4°C下以700-1000 x g離心血液10分鐘。用移液管移走頂部黃色等離子層，而不干擾白色褐黃色層。將血漿儲存在冰上，直到測定或在-80°C下冷凍。血漿樣品應(yīng)穩(wěn)定至少一個月。

3.通常，1:200-400稀釋的血漿樣品應(yīng)產(chǎn)生符合標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)果。

血清

通常，人血清中的膽固醇水平在2.5-7.5mM的范圍內(nèi)。

1.在不使用抗凝劑如肝素或檸檬酸鹽的情況下采集血液。讓血液在25°C下凝結(jié)30分鐘。

2.在4°C下以2000 x g離心血液15分鐘。用移液管移走頂部黃色血清層，不干擾白色血沉棕黃層。將血清儲存在冰上。如果當(dāng)天未進(jìn)行分析，則在-80°C下冷凍。樣品應(yīng)穩(wěn)定至少一個月。

3.通常，血清樣本的1:200-400稀釋度應(yīng)產(chǎn)生符合標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)果。

來源：https://www.amyjet.com/products/10007640-480.shtml