3 種檢測方法可用于蛋白質印跡：比色法、化學發(fā)光法和熒光法。每種檢測方法在靈敏度、定量、每次檢測成本或多重檢測方面都具有優(yōu)勢。

蛋白質印跡是種用于從生物樣品或溶液中鑒定特定蛋白質的分析技術。線性化的蛋白質通過凝膠電泳分離以按大小分辨它們，然后轉移到固定蛋白質的膜上，例如硝酸纖維素或聚偏二氟乙烯( PVDF)。用針對特定目標蛋白質的抗探測膜。然后使用與報告分子偶聯的二抗來識別抗并產生所需的信號。

Jackson公司：比色檢測

堿性磷酸酶 (AP) 和辣根過氧化物酶 (HRP) 偶聯物可用于比色檢測（圖 1(A)）。偶聯的報告酶催化顯色底物轉化為有色沉淀物，直接在印跡膜上顯現。比色檢測可以提供快速且容易獲得的結果，而無需昂貴的檢測器或廣泛的優(yōu)化。

Jackson公司：化學發(fā)光檢測

酶聯偶聯物也可用于化學發(fā)光信號檢測（圖 1(B)）。HRP 偶聯物通過將化學發(fā)光底物 (魯米諾) 氧化為發(fā)光形式來產生信號。

當酶將特定底物（例如 1,2-二氧雜環(huán)丁烷）去磷酸化為發(fā)光產物時，AP 結合物會產生信號。

然后可以通過將膠卷暴露在膜上或使用冷卻的電荷耦合器件 (CCD) 相機來捕獲信號�；瘜W發(fā)光檢測具有出色的靈敏度，但對多個目標的定量和探測可能會受到限制，開發(fā)可能需要改進以優(yōu)化信號捕獲。

Jackson公司：熒光檢測

熒光信號檢測使用熒光染料偶聯物來顯示膜上的抗原（圖 1 (C)）。特定于染料光譜特性的波長的光用于激發(fā)熒光染料。吸收的光將染料的電子激發(fā)到更高的電子狀態(tài)，當它們返回基態(tài)時，它們會以熒光團的發(fā)射波長特征發(fā)射光子。光線由配備適當濾光片的數字成像儀檢測。熒光蛋白質印跡允許定量分析和多重探測，而無需剝離和重新印跡。

備注：

圖 1：Western 印跡的 3 種檢測方法：(A) 比色法、(B) 化學發(fā)光法和 (C) 熒光法；A. 報道酶偶聯物催化顯色底物轉化為有色不溶性沉淀物，在印跡膜上肉眼可見。B. 報道酶偶聯物催化化學發(fā)光底物轉化為發(fā)光形式的反應，發(fā)射的光通過X射線膠片或CCD相機檢測。C. 報告熒光染料被其特征波長的光激發(fā)，產生的發(fā)射光被數字成像儀捕獲。

表 1：檢測方法的特點——優(yōu)缺點

參考文獻：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London

Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務域覆蓋各大學科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml