探針?lè)?i>Candidatus Mycoplasma turicensis實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Candidatus Mycoplasma turicensis

貨號(hào)：Mqt-tur-20      規(guī)格：20個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqt-tur-50      規(guī)格：50個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqt-tur-100     規(guī)格：100個(gè)反應(yīng)

儲(chǔ)存：-20度，避光保存，有效期年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1， 特異性檢測(cè)Candidatus Mycoplasma turicensis，與其他生物基因組沒(méi)有交叉反應(yīng)。

2， 使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)；采用熱啟動(dòng)方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

3， 帶有陽(yáng)性對(duì)照樣品（組分C），可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。

4， 帶有dUTP和UDG酶，可降低殘留DNA的污染。

嗜血支原體可以感染很多哺乳動(dòng)物，包括貓、犬、豬、牛、羊等，也包括人類(lèi)。目已知寄生于貓血中的支原體有三種：貓血支原體（Mycoplasma haemofelis），Candidatus Mycoplasma haemominutum和Candidatus Mycoplasma turicensis。這些細(xì)菌粘附在紅細(xì)胞表面生長(zhǎng)，也會(huì)給宿主造成些疾病，尤其是在貓免疫力下降的時(shí)候。有報(bào)道約14%的貧血貓呈血液支原體陽(yáng)性。Candidatus Mycoplasma turicensis寄生于貓紅細(xì)胞表面，在上述三種支原體中致病能力中等，且常與另兩種支原體合并感染，可引起溫和到急性的溶血性貧血，與貓免疫缺陷病毒合并感染時(shí)，或者可的松類(lèi)藥物處理后，臨床癥狀加重。

嗜血支原體無(wú)法在體外培養(yǎng)，因此難以開(kāi)發(fā)蛋白類(lèi)檢測(cè)方法。常用的檢測(cè)方法包括顯微鏡鏡檢法和PCR法。鏡檢法靈敏度低，實(shí)驗(yàn)誤差大，無(wú)法區(qū)分支原體種類(lèi)，易受血液中其他物質(zhì)以及人工涂片方法的干擾，且支原體易從紅細(xì)胞表面脫落，造成漏檢。而PCR法在靈敏度上則有明顯的優(yōu)勢(shì)，且可以區(qū)分支原體種類(lèi)。定量PCR法與普通PCR法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

本試劑盒基于16S rRNA基因的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性引物和探針，可以準(zhǔn)確識(shí)別Candidatus Mycoplasma turicensis，與其他生物基因組沒(méi)有交叉反應(yīng)。在236份貓血樣品中，檢測(cè)獲得14個(gè)陽(yáng)性，其中2個(gè)為Candidatus Mycoplasma turicensis單獨(dú)感染，2個(gè)為與貓血支原體共感染，3個(gè)為與Candidatus Mycoplasma haemominutum共感染，以及7個(gè)三種嗜血支原體共感染。

本試劑盒包含熱啟動(dòng)DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽(yáng)性對(duì)照品、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用戶(hù)只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

本試劑盒采用的DNA聚合酶源自端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的Taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過(guò)結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時(shí)DNA聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動(dòng)”功能。熱啟動(dòng)可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

UDG和dUTP用于消除PCR擴(kuò)增中的殘余污染。dUTP可以確保擴(kuò)增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可從單鏈或雙鏈DNA上去除尿嘧啶殘基，從而阻止含有尿嘧啶的DNA作為模板繼續(xù)擴(kuò)增。UDG在正常的PCR循環(huán)過(guò)程中被高溫滅活，對(duì)PCR反應(yīng)沒(méi)有影響。

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